再设计引物时,添加酶切位点和标签后,正反两个引物相差20个碱基,但在添加前相差不大,

来源：学生作业帮助网编辑：作业帮时间：2024/05/12 15:28:29

再设计引物时,添加酶切位点和标签后,正反两个引物相差20个碱基,但在添加前相差不大,
再设计引物时,添加酶切位点和标签后,正反两个引物相差20个碱基,但在添加前相差不大,

再设计引物时,添加酶切位点和标签后,正反两个引物相差20个碱基,但在添加前相差不大,
标签是指的表达标签么?如果是表达标签的话,载体上没有么?通常表达标签不是通过引物引入的,而是载体本来带有的,这个需要确认一下.
另外,引物的使用主要是看Tm值的差异,如果设计后,两条引物的Tm值相差过大,是不能够使用的,因为在退火时,找不到合适的退火温度.因此不能简单通过长短进行判断,需要根据两条的Tm值比较.一般引物设计软件上都有,如果相差太大,没法用.
另外,引物的长度也是有一定的限制的,20-35的长度比较理想,过长和过短都会个扩增带来麻烦,限制相差就差了20个,感觉有条引物太长了.确认下,标签是不是一定要带在上面.

标签是啥相差20个那得有40多bp？太长了吧。。。。

个人经验,其实无所谓.我在后面加过18bp的一段序列，没问题。

前面10个循环把退火温度适当的低一点,用你没加标签,没加位点的退火温度,然后再用高的退火温度扩20-30个循环,一般是没有什么问题的。引物只能这样设计了，不好用也只能用这个了。...

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个人经验,其实无所谓.我在后面加过18bp的一段序列，没问题。

前面10个循环把退火温度适当的低一点,用你没加标签,没加位点的退火温度,然后再用高的退火温度扩20-30个循环,一般是没有什么问题的。引物只能这样设计了，不好用也只能用这个了。

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再设计引物时,添加酶切位点和标签后,正反两个引物相差20个碱基,但在添加前相差不大, 有关PCR引物设计好像引物设计好以后,还要添加什么保护碱基,有时还要添加酶切位点,这些东西添加进去后,不是无法和模板链连接起来了吗?除非是把引物设计的所有要求统一起来,在模板链上加HIS标签的引物如何设计如何设计带flag标签的引物已知基因SCN2B,怎样用primer5设计引物,并添加酶切位点（Xho I-CCTCGAGG需标出）,写出引物序列和条件? 克隆引物和表达时引物设计的区别如何用PP5给设计好的引物添加限制性酶切位点【求助】请教：加HIS标签的引物如何设计您好!我想问一下：在做原核表达的时候,设计引物是不是还要加标签和启动子.还是载体本事就带有标签和启动子啊! 引物的设计原则引物设计原则和具体步骤!原理! 引物设计如何加入酶切位点引物设计如何加入酶切位点引物设计时如何添加酶切位点引物设计时如何添加酶切位点 PCR扩增基因设计引物时,用Primer5检测上游引物和下游引物的互补性,显示free energy= 1.50 Kcal/mol这样的引物可用吗? 引物设计问题,以mRNA序列设计引物,然后用cDNA为模板来扩增,在设计引物时mRNA序列是否要反转序列?我想的是,不反转的话设计的引物是和mRNA互补的,而mRNA合cDNA,这样的话设计的引物就不和cDNA互 pcr引物设计为什么要引入酶切位点做PCR时,怎么设计引物?