关于PCR克隆基因的引物问题想拿到一个基因的CD区,CD区一共1400bp,用引物A（上游引物）,B（下游引物）扩出了1-1200bp前面一段,引物C（上游引物）,D（下游引物）扩出了1000-1400bp后面一段,可是用A

来源：学生作业帮助网编辑：作业帮时间：2024/05/06 20:32:22

关于PCR克隆基因的引物问题想拿到一个基因的CD区,CD区一共1400bp,用引物A（上游引物）,B（下游引物）扩出了1-1200bp前面一段,引物C（上游引物）,D（下游引物）扩出了1000-1400bp后面一段,可是用A
关于PCR克隆基因的引物问题
想拿到一个基因的CD区,CD区一共1400bp,用引物A（上游引物）,B（下游引物）扩出了1-1200bp前面一段,引物C（上游引物）,D（下游引物）扩出了1000-1400bp后面一段,可是用A和D做引物PCR什么条带都没有,甚至连引物二聚体都没有...用primer5分析这对引物虽然得分不高,但也还算可以,毕竟这两个引物和别的引物一对的话还是能扩出来的...请大家帮忙分析一下原因,是否还有必要继续摸索条件用这对引物继续扩完整CD区...跪谢...TT

关于PCR克隆基因的引物问题想拿到一个基因的CD区,CD区一共1400bp,用引物A（上游引物）,B（下游引物）扩出了1-1200bp前面一段,引物C（上游引物）,D（下游引物）扩出了1000-1400bp后面一段,可是用A
你看,你分别获得了1-1200 nt以及1000-1400 nt这两段序列,那么中间有200 bp长度的序列是重叠的,对吧?也就是说你已经从序列信息上获得了这个CD区所有的序列信息.如果你只是需要序列信息的话,已经足够了,但是如果你需要扩增得到这完整的1400 bp用于后续的实验,那么你需要继续扩增完整的CD区.
如果这样的话,我有个小窍门,你可以把1-1200 nt以及1000-1400 nt这两个片段混合和作为模板,然后利用引物A和D进行扩增,很容易就能得到完整的1400 bp产物,不过前提是你第一步变性退火的时候,时间适当的长一些,让这两个大片段能够混合退火,即让两个片段重叠的200 bp部分能够退火,便于你扩增.

pcr反应条件呢。用引物A和D扩增时，72度延伸那步的延伸时间足够么72度延伸2分钟，温度也试过几种，都没扩出来...有可能碰到核酸高级结构难以扩增。建议使用takara的PrimeStar，特牛，使用还方便，也不很贵。我们实验室里有几个基因用Taq扩不出来，用它一扩就出来了。但它没有A尾，扩增产物不能直接连T载体。...

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pcr反应条件呢。用引物A和D扩增时，72度延伸那步的延伸时间足够么

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你可以做一下梯度pcr，效果很明显；另外你可以选用La taq酶。希望能帮到你、

如果你需要完整的CD区来做后续实验的话，那么你需要继续将CD区扩增完整。

关于PCR克隆基因的引物问题想拿到一个基因的CD区,CD区一共1400bp,用引物A（上游引物）,B（下游引物）扩出了1-1200bp前面一段,引物C（上游引物）,D（下游引物）扩出了1000-1400bp后面一段,可是用A 克隆一个未知的基因拿到序列需要多久?我想克隆一个未知的基因,简并引物反转录再RACE全长.不做表达的话要多久?保守估计.基因不是特别偏,是受体亚基.鱼脑. 普通PCR和基因克隆PCR的引物设计有什么不同和注意事项? 关于T-A克隆的一些问题我做完了T-A克隆,提取质粒以后,用我的目的基因引物做PCR,跑电泳跑出来了目的条带,但是有一些杂带,是怎么回事呢. 自己设计了一对引物克隆一段基因,PCR出不来结果可能是什么问题? 关于PCR的问题：PCR如果目的基因扩增出来了是不是条带中的引物二聚体就没有了呀? 想请教一个PCR基本问题.PCR时,目标基因的核苷酸序列是未知的,那我们设计引物是根据其近缘种的基因设计PCR时,目标基因的核苷酸序列是未知的,那我们设计引物是根据其近缘种的基因设计吗? 关于real time PCR 引物设计的问题我想设计几个植物中基因的引物,然后进行real time PCR,引物设计有什么要求或是注意事项吗?有哪些设计技巧呢? PCR的扩增基因的引物是什么克隆基因若某个基因已经报道,这个基因在小鼠已经有全序列报道,在猪却没有,我想在猪组织中拿到这基因,那设计RT-PCR引物模板哪儿找啊? 引物的设计 PCR扩增连接转化这一系列是什么的步骤基因克隆吗?那引物是干嘛用的基因的构建与基因的克隆是指一个意思么?就是通过PCR扩增获得目的基因?问题很小白哈. PCR产物测序问题.我用简并引物扩增未知基因.设计了几对引物.都出现了目的条带.发现其中两对引物的产物长度比较长.因为我最终是要拿到这个未知基因的全长.我想选择最长的目的条带去测 PCR引物设计应该注意的问题? 为什么在基因克隆中,除开设计PCR引物还要设计表达基因引物?如题.设计表达引物有什么要求吗? 引物分哪几种?扩基因所用的引物和做RT-PCR的引物一样吗? 基因克隆中有关点突变引物设计问题我需要用引物设计点突变一段基因的3‘端几组氨基酸密码子（每次突变一个氨基酸密码子）,突变的密码子已确定,不能用密码子的兼并性,想请问一下各位关于实时定量PCR的问题想做BDNF基因的实时定量PCR,要用SYBR Green法比较不同组BANF的表达情况.设计好基因引物后怎么做?要不要设计内参,如何分析结果?有哪些步骤流程?我是新手啊,请高手指教.