作业帮分子克隆技术包括哪些基本步骤?
来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/05/11 15:55:02
分子克隆技术包括哪些基本步骤?
分子克隆技术包括哪些基本步骤?
分子克隆技术包括哪些基本步骤?
1.带有目的基因的DNA片段的获得
2.重组DNA分子的构建
3..重组DNA分子的构建转化和重组克隆的筛选
4.特定重组克隆的鉴别
首先是利用PCR技术进行目的基因的扩曾，主要是要根据序列设计出合理的引物
其次是把扩增的片段连接到克隆载体，如pGEM-4T-1上构建重组载体
最后将构建好的重组体进行PCR、酶切鉴定之后转入大肠杆菌中进行表达
1、提取DNA基因组或则mRNA（可用试剂盒完成，一般问题都能解决）。
2、设计引物，PCR扩增目的片段。
3、选择合适质粒载体，进行酶连接，构建亚克隆子（有商品化质粒可供选择）。
4、用构建好的质粒转化感受态细胞（方法生物技术实验书中有详细介绍）。
5、筛选阳性克隆。...
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1、提取DNA基因组或则mRNA（可用试剂盒完成，一般问题都能解决）。
2、设计引物，PCR扩增目的片段。
3、选择合适质粒载体，进行酶连接，构建亚克隆子（有商品化质粒可供选择）。
4、用构建好的质粒转化感受态细胞（方法生物技术实验书中有详细介绍）。
5、筛选阳性克隆。
收起
分，切，接，转，筛。
分：分离目的基因。
切：限制酶切割目的基因与载体。
接：拼接重组体。
转：转入受体菌。
筛：筛选重组体。
1.获得载体质粒和目的片段
2.酶切
3.连接
4.转化
5.菌落PCR筛选阳性菌落
6.测序