自己设计比较完美的引物有个别扩增不出来目的片段或者扩增不够理想,请问是什么原因?有什么方法解决?做梯度PCR也没什么效果,请问该怎么解决?

自己设计比较完美的引物有个别扩增不出来目的片段或者扩增不够理想,请问是什么原因?有什么方法解决?做梯度PCR也没什么效果,请问该怎么解决? 我之前是自己设计的引物,可是没有扩增出来片段,最后就选择用文献中的引物. 特异引物PCR问题各位大牛,小弟初涉分子生物实验,最近在用设计好的特异性引物扩增保守序列,可是总也是扩增不出来,常常是只有引物二聚体,没有任何扩增条带,我也试着在引物报告单上所给 我有上下游引物,如何知道我扩增出来的序列是什么?E-PCR是不是可以实现这个功能?我设计了 人源的AKT1引物看能否用来扩增小鼠的AKT1 “为避免基因组的扩增,引物设计最好能跨两个外显子” 什么叫基因组的扩增?本身扩增的难道不就是基因组DNA吗? 为什么PCR引物设计中引物可以不从扩增序列两头开始?不从两头开始能得到上下游引物以外的序列吗? 我要进行PCR扩增,自己不会设计引物,主要是primer不太会用.打算引用国外文献上的引物设计,但是同一个基因,PubMed上不同文献有不同的引物设计,目前该基因我已经发现了好几种版本的引物设计. 设计的引物扩增出两条大小相近的片段怎么办 真菌18srdna引物有哪些序列是多少,扩增出来的目标片段有多大? 设计引物时,扩增产物的长度是如何知道 用基因组DNA做模板进行PCR扩增,设计引物所选序列也用cDNA为模板有什么不同是用这两个模板做pcr，在设计引物时，设计引物所用的序列有区别么 pcr 如果把全部模板DNA扩增出来,引物怎么设计 pcr扩增中,如何设计引物? 引物设计问题,以mRNA序列设计引物,然后用cDNA为模板来扩增,在设计引物时mRNA序列是否要反转序列?我想的是,不反转的话设计的引物是和mRNA互补的,而mRNA合cDNA,这样的话设计的引物就不和cDNA互 我想扩增某一目的基因,请问引物一定要在起始密码子和终止密码子周围设计吗?我可不可以在起始密码子前面的一段序列中设计引物?我以前是这样设计的,但是一直都扩不出来,怎么办? 引物发夹结构我用的是文章里面的引物,与NCBI里面的序列比对,符合度100%,279bp大小,但是就是扩增不出来目的片段,只有引物二聚体,现在我想比对下,看看我用的引物是不是有严重的发夹结构,请 对于一段有重复序列的片段如何扩增,只是一个基因的中间的部分序列,准备扩增做overlap.我在两端设计的无配对引物,无法扩增目的条带,不知对PCR 条件有什么要求? PCR引物设计中,引物上是否需要每个碱基都与模板链结合?为了得到想要的Tm值,或是保证长度,不产生二聚体等,可不可以有在引物上添加一些不配对的碱基?如下图：可以的话,会对扩增有影响么?